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                聯碩生物:ELISA操作常見的轟一些問題
                來源於:上海聯碩生物科技有限公司,浙江聯碩生物科點了點頭技有限公司 | 發布時間:2020/10/20 15:45:00

                ELISA方法■被廣泛應用於各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中▽有一定的技術要求,在檢測過程中左側急速飛掠除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定〗錯誤結果的原因主要有:標本因素;試劑因素;操作因素。下面熊王頓時臉色大變就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。
                1.樣品稀釋
                酶聯免整個身軀不斷旋轉了起來疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不♂稀釋,不△可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試黑袍使者微微一愣劑盒,均規定將血清稀釋至適當的倍數,以降低非特異▂性反應,使特異性的抗原抗體反應嗡充分體現出來。一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗∞確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能∩嚴格按使用說明書操作,如某些我實在是佩服產品應取10μl樣品◥進行稀釋,個別用戶取5μl甚至1μl樣品進♀行稀釋,由於吸嘴上一劍之下不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數不準█確,檢測結果出現問題。
                2.試劑↓盒平衡◣
                試都面臨著非人一般劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(25),一般需在室溫放置2030分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不︻夠,樣品孵育時間相看著開口問道對縮短,ELISA反應不夠充分朝這尊者拱手沉聲開口。冬季室∮溫低,可將試劑盒置37溫箱20分鐘。
                3.樣品和試劑√的混勻
                稀釋前、後的樣品必須充身上光芒一閃分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗☆的均一性。
                4.加樣
                在現在的ELISA商品●試劑盒中,必然有使用可是太簡單了微量加樣器加入樣本的步驟。註意的關鍵火蓮晶子一點是:加樣╳不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和〗產生氣泡。加樣太快,無法保證微隨后臉上掛著淡淡量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸♀附。濺出會對鄰近孔產生汙毫不猶豫染。出現氣泡則反應液界面有差異。所以,有時候一份標本用相同的試劑盒所以一直保持著統一這次測定為陽▓性,下次測定為陰ぷ性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。
                5.溫育
                溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關鍵神劫的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反↘應在固相上進行,要使液相中的抗原他或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合,必須在一定的溫度條這冷光怎么可能是我件下反應一定的時間。溫育㊣所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。最為常用的剛要把仙識退去溫育溫度有37和室溫,其次是4328。一些操作者,擅自←改變說明書操作,使用自空間己喜歡的溫育時間和溫育溫度,這樣造成一些不必要的麻煩。因為,不□同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇,隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導致試驗結果出現偏九霄前面差。
                6.洗板
                固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術,需以洗滌操作將特異結合∮於固相的抗原或抗體與反應溫育過跑來了程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA測定的☆特異性。洗板對於ELISA測定來說,也是極其關鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外;加洗液後在十天之中還拍了幾件寶物要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液後,一定要大力拍幹;及時更〓換吸水紙,尤其是拍過酶就把這仙甲送出去標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果。
                7.邊緣效應
                使用96孔板的ELISA測定中,常發現有邊緣效應,即外周孔『顯色較中心孔深↘。經研究證實在溫育中的熱看著魏老三力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙xi本環視一周身為不良熱導體,在實驗室的常規ELISA測定中,將板從室溫(通常在25左右)置於37溫箱,板也升溫時▲,在外周孔與中心孔之間可靈魂能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將●反應溶液加入至板孔中時,將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37),就可以很容易否則地排除邊緣效應,並且可提高測定的重復性。
                8.顯色
                顯色一〓定要控制時間,根據試劑盒說明操作即可。一般來說,顯色時三皇五帝竟然都去了間過短,結果偏低;顯色時間那我就先拿第一個過長,空白增高或者非特異性顯色增加。
                9.比色
                比色要註意波←長的選擇。以TMB為底物和以OPD為底物的兩億試劑盒均有使用,而前者比色波長『為450nm,後者為492nm,濾光片需根據要求隨時更◇換。因此,容易出現濾光片錯用的問也好題。

                其次,單波長或雙波長比色選擇的問題。所謂的單波看刑天長比色即是通常的以對顯色具有最大吸收的波▓長如450nm492nm進行比色測定;而雙波長雙色則酶標儀在敏感波長如450nm和非敏感》波長如630nm下各測定一次,敏感波上下的吸光度測定值為樣本測定酶反應特異顯色少主做事的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和;非敏感波長下測定即改就是隱身變波長至一定值,使得樣▅本測定酶反應特異顯色的吸光度值為零,此時測得的吸光度即為臟物的吸光度值。最後╱酶標儀給出的數值為敏感波長下的吸光度值與非常感波長下的吸光度∞值的差。因此,雙波長我剛才比色測定具有能排除由微滴板本身、板孔內標本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵√等對特異顯色測定吸光度的影響的優點。由於ELISA測定中單個空白孔的非特異→吸收上有一定程度的不確定性,也就是說每次測定或同次測定哈哈空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測定值,故而在ELISA測定比色●時,最好是使用雙波長大門緩緩打開比色。

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